Окраска цитологических мазков

Содержание
  1. Мазок на цитологию: что показывает, расшифровка, норма и патология
  2. Цитологическое исследование в гинекологии
  3. Что такое мазок на цитологию
  4. Показания к проведению мазка на цитологию
  5. Противопоказания для цитологического исследования
  6. Подготовка к мазку на цитологию шейки матки
  7. Как берется мазок на цитологию шейки матки
  8. Расшифровка цитологического исследования мазка шейки матки
  9. Интерпретация ПАП-теста
  10. Расшифровка мазка на цитологию по методу Бетседа
  11. Термины в диагнозе при цитологическом анализе мазка шейки матки
  12. Сколько дней делается анализ мазка на цитологию
  13. Окраска цитологических препаратов
  14. Окраска гематоксилин-эозином, ускоренная методика.
  15. Окраска по Райту
  16. Схема ускоренной окраски гематоксилин-эозином, разработанной в МНИОИ им. П. А. Герцена
  17. Мазок на цитологию (Пап-тест) — что показывает цитограмма?
  18. Обработка мазков. Сроки выполнения цитологии
  19. Цитограмма без особенностей — что это значит?
  20. Атрофический тип мазка — что это значит?
  21. Терминология
  22. Классификация Bethesda (США) — расшифровка цитограммы
  23. Тест по Папаниколау | Университетская клиника
  24. Что такое анализ по Папаниколау?
  25. Особенности подготовки
  26. Когда проводят тест по Папаниколау?
  27. Как берут мазок?
  28. Цитологическое исследование мазков по Папаниколау
  29. Метод Папаниколау: расшифровка
  30. ссылкой:

Мазок на цитологию: что показывает, расшифровка, норма и патология

Окраска цитологических мазков

статьи:

Мазок на цитологию или ПАП-тест у женщин имеет большое диагностическое значение, поскольку дает возможность выявить злокачественный процесс в начальной стадии и своевременно назначить терапию.

Цитологическое исследование в гинекологии

Под цитологическим анализом в гинекологии понимают микроскопические изучение на предмет типичности клеточного состава образцов, взятых из влагалища и шеечного канала.

Такая диагностика дает медикам возможность делать выводы о наличии воспалительных процессов, предраковых заболеваний или же рака в репродуктивных органах пациентки. В отличие от гистологического исследования цитологический метод является неинвазивным.

То есть, при взятии биологического материала нет необходимости выполнять биопсию или прокол, и целостность ткани абсолютно не нарушается. Анализу подвергают образцы, взятые при помощи отпечатка или мазка. Для получения точных результатов необходимо тщательно соблюдать правила подготовки к обследованию.

Также очень важно, чтобы анализ расшифровывал лечащий врач женщины, который примет во внимание ее жалобы и данные других методов диагностики. На выполнение цитологического анализа обычно требуется не более суток.

Если при этом было обнаружено предраковое состояние или онкологический процесс, для уточнения диагноза прибегают к инвазивным диагностическим методикам – биопсии. Цитология особенно важна при противопоказаниях к биопсии и при обследованиях большого числа пациенток (когда необходимо выявить женщин, водящих в группу риска по развитию злокачественной патологии).

Что такое мазок на цитологию

Мазок на цитологию (ПАП-тест, анализ Папаниколау) представляет собой изучение под микроскопом мазка из шейки матки с целью раннего выявления раковых заболеваний. Также этот анализ еще называют гитологический мазок или мазок на онкоцитологию. Такое обследование легко переносится пациентками, поскольку является совершенно безболезненным и не занимает много времени.

Цитологический мазок не только делает возможной своевременную диагностику клеточных аномалий, но и помогает выявить присутствие во влагалищной среде нежелательной микрофлоры.

При этом точных данных о выявленных патологиях тест не дает, и в случае получения неблагоприятного результата пациентку направляют на дополнительное обследование (мазок на флору у женщин) и на анализ на ЗППП.

С помощью цитологического метода, который успешно используется в гинекологической практике уже десятки лет, можно выявить 5 видов изменений в клетках пациенток. При этом исследование является очень простым и доступным по стоимости. Проходить его врачи советуют всем женщинам возрастной категории от 18 до 65 лет как минимум раз в год. По результатам анализа можно достоверно установить наличие или отсутствие какой-либо патологии.

Показания к проведению мазка на цитологию

Мазок на цитологию желательно сдавать всем женщинам. В возрасте до 40 лет достаточно проходить такую диагностику один раз в год. Представительницам старших возрастных групп нужно обследоваться раз в 6 месяцев.

Некоторые случаи являются обязательными показаниями к проведению теста. К ним относятся: – Воспаления в цервикальном канале, шейке матки, особенно если они протекают хронически. – Нарушения менструального цикла. – Проблемы репродуктивного характера.

– Подготовка к хирургическим вмешательствам и другим медицинским манипуляциям. – Планирование беременности. – Подготовка к установке спирали. – Прием гормональных средств. – Диабет. – 2-я и 3-я степень ожирения.

– Присутствие в организме некоторых вирусов (папилломы человека, генитального герпеса). – Частая смена сексуальных партнеров.

Противопоказания для цитологического исследования

Мазок на цитологию не берут во время менструаций. Если нужно оценить присутствие атипичных клеток, не стоит проводить анализ во время воспаления влагалища и шейки. Дело в том, что большое число лейкоцитов просто «закроет» патологические клетки, и обнаружить их цитологическим методом будет невозможно.

Подготовка к мазку на цитологию шейки матки

Чтобы получить максимально точный результат, необходимо соблюдать несколько несложных правил:

– Не выполнять спринцевания. – Не использовать лекарственные средства местного действия (свечи, мази и т.д.). – Подождать, когда закончатся месячные. – Не мочиться за три часа до взятия мазка. – Воздерживаться от половых актов в течение двух суток перед исследованием. Если имеет место воспалительный процесс, при котором выделяется много секрета, болезнь необходимо пролечить и сделать контрольный мазок для подтверждения выздоровления. И только после этого имеет смысл выполнять цитологический анализ.

Как берется мазок на цитологию шейки матки

Взятие онкологического мазка выполняет врач-гинеколог при осмотре пациентки. Сначала с использованием зеркал доктор изучает состояние влагалища, осматривает вход в цервикальный канал и слизистую оболочку шейки. Затем с трех участков (влагалище, цервикальный канал, вход шейки матки) при помощи особой щеточки берется материал на анализ.

Процедура занимает совсем немного времени и не причиняет пациенткам никаких болезненных ощущений.
Собранный материал помещают на предметное стекло, равномерно распределяют и после подсушивания передают в медицинскую лабораторию. Там мазок окрашивают специальными веществами и рассматривают под микроскопом.

При этом оценивают такие характеристики:

– Размеры клеток и их строение. – Количество клеток (на определенную единицу площади). – Взаимное расположение. – Форма эпителия. – Наличие патологических изменений в клетках.

Строения многослойного плоского эпителия шейки матки

Строения многослойного плоского эпителия слизистой оболочки влагалища

А — базальный слой (а — базальные клетки, б — парабазальные клетки)

Б — промежуточный слой, В — поверхностный слой; справа изображены отдельные клетки соответствующих слоев эпителия влагалища.
После процедуры взятия материала пациентка может сразу же возвращаться к своей обычной деятельности. Никакого дискомфорта в норме быть не должно, поскольку щеточка не может травмировать ткани. Правда, существует вероятность, что будет задет маленький кровеносный сосуд. Тогда в течение 1-2 дней после анализа будут наблюдаться незначительные кровянистые выделения (прожилки). Это явление не должно вызывать у женщины беспокойства.

Расшифровка цитологического исследования мазка шейки матки

Шейка матки здоровой женщины покрыта цилиндрическим эпителием, а влагалище плоским. Что касается вагинальной микрофлоры, то она представляет собой не кокки, а палочки. Некоторые показатели зависят от фазы цикла – карио-пикнотический и ацидофильный индексы, базальные и парабазальные клетки, число лейкоцитов. Они дают информацию о работе яичников.

Интерпретация ПАП-теста

В зависимости от состояния эпителиальных клеток подвергнутые цитологическому исследованию мазки из влагалища делятся на пять классов (методика Папаниколау):

Класс 1. Отсутствие патологических изменений в исследованном материале. Клетки имеют нормальные размеры и форму, правильно расположены.

Класс 2. Понижена морфологическая норма некоторых клеточных элементов, что является признаком воспаления или инфекции. Такой результат может быть признаком вагиноза. В подобных случаях показана дальнейшая диагностика для постановки точного диагноза и подбора адекватной терапии.

Класс 3. В материале присутствуют единичные клетки с нарушениями в строении ядра и цитоплазмы (дисплазия или же гиперплазия). Число таких патологических клеток невелико. Пациентку направляют на повторную цитологию.

Класс 4. В исследованном мазке обнаруживаются клетки со злокачественными изменениями ядра, хроматина и цитоплазмы. Эти патологические изменения говорят о наличии у пациентки предракового состоянии.

Класс 5. Присутствие в мазке большого количества атипичных клеток (их намного больше нормы). В таком случае диагностируют начальную стадию рака.

Расшифровка мазка на цитологию по методу Бетседа

Расшифровку цитологического анализа материала, взятого из цервикального канала, выполняют по методу Бетседа. При этом учитываются расположение клеток и дискариоз (изменения в ядре). Результаты исследования могут быть такими:

– Норма. Отсутствие патологии не имеет какого-либо специального обозначения. – Вагиноз, койлоцитоз – HPV.

– Дисплазия шейки матки в зависимости от степени – CIN I, CIN II или CIN III.

– Рак шейки матки – Carcinoma (pax).

Термины в диагнозе при цитологическом анализе мазка шейки матки

В гинекологической практике для описания результатов цитологических исследований принято использовать такие обозначения и термины:

– ЦБО. Нормальные показатели, патологических изменений нет. -Цитограмма воспаления. Показатели, говорящие о развитии воспалительного процесса (цервицита). – Лейкоцитарная инфильтрация – повышенное число лейкоцитов. Это является признаком вагиноза, экзоцервита или эндоцервита. – Койлоциты – присутствие клеток, говорящих о ВПЧ. – Пролиферация – ускорение клеточного деления. Такое состояние характерно для воспалительного процесса в матке. При сильной пролиферации имеет место запущенное воспаление. – Лейкоплакия – в мазке присутствуют патологически измененные (но при этом не раковые) клетки. – Метаплазия – один вид клеток замещается другим. Считается нормой для пациенток, которые проходили лечение неонкологических патологий матки в менопаузе. Кроме того, это состояние нормально для женщин, пребывающих в менопаузе более 6 лет. – Дисплазия – предраковая патология.
Для описания результатов анализа мазка, содержащего атипичные клетки, используются такие сокращения:

– ASC-US – наличие измененных клеток плоского эпителия с неизвестной этиологией. Чаще имеет место у пациенток старше 45, когда снижается производство эстрогенов.

– AGC – изменения цилиндрических клеток, которые могут говорить о вагинозе или каких-либо других заболеваниях. Такой результат требует дополнительной уточняющей диагностики.

– L-SIL – присутствие небольшого числа атипичных незлокачественных клеток. В этом случае пациентку направляют на дальнейшее обследование (биопсия и кольпоскопия).

– ASC-H – патологические изменения в клетках, которые свидетельствуют о предраковой патологии или же о начинающемся онкологическом процессе.

– HSIL является онкоцитологией (присутствуют измененные плоские клетки). Таким пациенткам проводят безотлагательные лечебные мероприятия, чтобы не допустить перерождения в злокачественную опухоль.

– AIS – Эта аббревиатура говорит о том, что были выявлены цилиндрические злокачественные клетки. При таких результатах необходимо срочное лечение.

В случае выявления в мазке патологически измененных клеток лаборант обязательно укажет это в письменном заключении с уточнением типа изменений. Если же в расшифровке анализа никаких особых обозначений нет, то, по всей вероятности, мазок соответствует норме. Точный диагноз на основании только этого теста поставить нельзя. Для определения характера патологии гинекологу нужно сравнить результаты разных обследований.

Сколько дней делается анализ мазка на цитологию

На цитологический анализ мазка обычно требуется от 1 до 5 суток.

Важно помнить, что онкологический процесс не возникает за несколько дней. От первых патологических изменений до злокачественного перерождения проходит довольно много времени.

Поэтому своевременное выявление атипичных клеток в организме женщины дает возможность предотвратить развитие рака шейки матки.

Для этих целей и был повсеместно введен доступный и простой метод ранней диагностики злокачественных клеток – цитологическое исследование мазка.

Справочник

Клиники и врачи

  • Клиники вашего города
  • Врачи вашего города

Источник: https://genitalhealth.ru/130/Mazok-na-tsitologiyu-chto-pokazyvaet--rasshifrovka--norma-i-patologiya/

Окраска цитологических препаратов

Окраска цитологических мазков

1) Вида и состава красителя;

2) Концентрации красителя, которая не всегда определяет красящую способность;

3) Продолжительность окраски;

4) Возраста окрашиваемого препарата. Препараты от 6 часов и до нескольких дней давности в большинстве случаев теряют мелкие структуpные тонкости;

5) pH среды оказывает сильное влияние на окрашиваемость и тон окраски. По-видимому безразлично каким способом добавляют pH-ионы, важна лишь их концентрация;

6) Не обнаружено никаких различий окрашиваемости от температуры холодильника до комнатной температуры.

Окраска гематоксилин-эозином, ускоренная методика.

Отечественными цитологами (А. В. Руденко
и Л. К. Куница)  предложены модификации метода, в которых компоненты заменены на более доступные (например, светлый зеленый заменен на  бриллиантовый зеленый).

При окраске по Папаниколау в модификации А. В. Руденко и Л. К. Куницы мазки вначале окрашивают гематоксилином, хорошие результаты получены при использовании гематоксилина Бемера.

Мазки крови, высушенные на воздухе, окрашиваются специальными красителями с целью идентификации цитоморфологически важных структур в клетках крови.

    Кислые вещества клетки (выглядят базофильными) связывают основные красители.

Основные клеточные субстанции (ацидофильные) окрашиваются кислыми красками.

Нейтральные компоненты клетки визуализируются при помощи нейтральных растворов-красителей.

Краситель состоит из щелочной части (азур II — ярко-синий цвет), и кислой части (эозин — розово-красный цвет).

В настоящее время используется готовый краситель Романовского-Гимзе, из которого перед началом работы готовят рабочий раствор из расчета 1 капля краски на 1 мл дистиллированной воды.

Высохший фиксированный мазок помещается в кювету с рабочим раствором краски на 25-40 минут (конкретное время устанавливается опытным путем для каждой партии красителя).

    Ядра клеток — красно-фиолетовые; Эозинофильные гранулы — красновато-коричневые; Базофильные гранулы — синие; Нейтрофильные гранулы — фиолетовые; Цитоплазма лимфоцитов — голубая; Эритроциты — бледно-красные; Тромбоциты — наружная часть синяя (более светлая); внутренняя — фиолетовая (более темная).

Данный метод очень удобен для визуализации гранулоцитов.

Для окрашивания применяется готовый раствор эозинметиленового синего по Маю-Грюнвальду. Мазок без предварительной фиксации заливают красителем, через 5 минут промывают и высушивают.

    Лимфоциты — ядра: сине-фиолетовые; цитоплазма: голубая; Моноциты — ядра: сине-фиолетовые; цитоплазма: серо-голубая; Гранулоциты — ядра: сине-фиолетовые; гранулы: красные, фиолетовые, темно-синие (зависит от типа); Тромбоциты — наружная часть голубая; внутренняя — фиолетовая; Эритроциты — розовые.

Представляет собой комбинацию двух предыдущих методов.

Сухие нефиксированные мазки помещаются в кювету с раствором Мая-Грюнвальда на 3..5 минут. После этого контейнер с мазками ополаскивается дистиллированной водой, после чего мазки помещаются в кювету с разведенным раствором Романовского-Гимзы на 20..30 минут. После этого мазки промываются проточной водой и высушиваются.

    Ядра клеток — красно-фиолетовые; Цитоплазма лимфоидных клеток — светло-синяя; Лимфоидная азурная грануляция — ярко-синяя; Миелоидная азурная грануляция — фиолетовая; Нейтрофильные гранулы — светло-фиолетовые; Эозинофильные гранулы — красные, красно-коричневые; Базофильные гранулы — темно-фиолетовые, черные; Эритроциты — розовые (полихроматофильные эритроциты — синеватые); Тельца Жолли — красновато-фиолетовые; Тельца Ауэра — ярко-красные.

ПОДРОБНЕЕ:   Анализы при эрозии шейки матки

Окраска по Райту

На сухой нефиксированный мазок наносится 1 мл красителя, через 1 минуту добавляется 1 мл дистиллированной воды. Через 2..3 минуты промывают в дистиллированной воде и высушивают на воздухе. Окраска аналогична предыдущему методу.

В красящих смесях Романовского и сходных с ним прописей Гимзы, Райта, Лейшмана в качестве ядерных краси телей используют тиазины.

В их ряду — тионин-анилиновый краситель и его моно-, ди-, три — и тетраметилпроизводные азур С, азур А и азур В, метиленовый синий — широко применяются в цитологических исследованиях как ценные ядерные красители со свойством метахромазии для эксфолиативной и пункционной цитологии, для клеток крови, костного мозга, окрашивания бактерий.

Сочетание тиазинов с красителями эозиновой группы дает известную много вариантность методов. Красители типа Романовского, названные по именам авторов, которые стремились добиться стабильности состава тиазинов (Гимза, Лейшман, Дженнер, Май-Грюнвальд, Мак Нил, Райт и др.), в принципе дают сходные результаты окрашивания.

Результаты окрашивания мазков крови: цитоплазма лимфоцитов окрашивается в светло-синий цвет, их ядра — в цвета от интенсивно пурпурного до фиолетового, ядра моноцитов в более светлый пурпурно-красный, их цитоплазма в мутный голубовато-серый, грануломеры тромбоцитов в красный, гиаломеры — в голубой, гранулы базофилов — в интенсивный сине-фиолетовый цвет, гранулы эозинофилов — в оранжево-розовый, а нейтрофильных лейкоцитов — в цвета от пурпурного до фиолетового.

Референтным признается метод Романовского, состоящий из азура В и эозина Y.

Азур-эозиновые красители позволяют четко определять ранние некробиотические изменения в клетках, поскольку обычный светло-голубой оттенок цитоплазмы резко меняется на светло-розовый.

В синий цвет обычно окрашиваются ядра, бактерии, риккетсии, тигроид и рибонуклеопротеиды, в голубовато-фиолетовый — гранулы тучных клеток и базофилов, цитоплазма зрелых клеток — от голубого до фиолетового и бледно-лилового цвета.

цитоплазма клеток в состоянии некроза и некробиоза — ярко-розовая, секреторные гранулы ацинарных клеток (под желудочной железы, слюнных желез) от розового до красного.

Амилоид, фибрин окрашиваются в розовый цвет, цитоплазма мышечных волокон, коллоид щитовидной железы — в серовато-синий, кератин — ярко-голубой. Эритроциты оранжево-красного цвета.

Окраска мазков по Wright-Giemsa (№ 9990710)

На основе эозинатов полихромного метиленового синего

1. Погрузить предметные стекла в раствор красителя Райт-Гимза на выбранное время (примерно 60 секунд). Не взбалтывать краситель!

ПОДРОБНЕЕ:   Язва желудка и двенадцатиперстной кишки – Диагностика

2. Осушить или промокнуть свободную часть предметного стекла (или стеклодержатель), чтобы удалить избы ток краски.

3. Погрузить предметное стекло в буферный раствор примерно на то же самое время, что и время в красителе (60 секунд). Увеличение или уменьшение времени пребывания мазка в краске или буфере будет менять окончательный цвет препарата.

4. Осушить или промокнуть свободную часть препарата (или стеклодержатель), чтобы удалить избыток бу фера.

5. Погрузить мазок в раствор очистителя на 2-10 секунд, быстро взбалтывая.

6. Протереть обратную сторону стекла.

7. Высушить окрашенный мазок в вертикальном положении, поставив на адсорбирующую поверхность (напри мер, на фильтровальную бумагу). Не промокать мазок!

8. Нанести каплю масла и исследовать мазок под микроскопом. Результаты: как при окрашивании по Романовскому.

Ускоренный метод Giemsa-Kwik-Diff (№9990700)

Приготовленный мазок высушивают.

Готовят 3 контейнера (сосуды Коплина или кюветы). Наполняют Kwik-Diff раствором № 1 (фиксатор), второй сосуд — раствором № 2, третий — раствором № 3.

1. Погрузить стекла или держатели со стеклами 5 раз (1 секунда на погружение).

2. Дать стечь раствору в сосуд, обсушить край стекла.

3. Погрузить стекла или держатели стекол в раствор № 2,5 раз (одно погружение — 1 секунда). Дать жидкости стечь, обсушить край.

4. Погрузить стекла или держатель со стеклами в раствор № 3 — 5 раз (одно погружение — 1 с). Дать жидкости стечь, обсушить край фильтровальной бумагой.

5. Промыть стекло или держатель со стеклами путем погружения и покачивания в дистиллированной или де-ионизированной воде.6. Высушить на воздухе или использовать теплый воздух сушилки.

Окрашивание мазков гематоксилином-эозином

Могут использоваться различные виды гематоксилинов: Gill, Harris, кислый и неподкисленный.

1. Фиксация мазков в спирте-эфире или 96% этаноле.

2. Окрашивание в гематоксилине Gill 2 (№ 6765007) — 3-5 минут.

3. Промывание в проточной воде 1-2 минуты.

4. Окрашивание в 0,3% спиртовом растворе эозина Y (Instant, Eosin № 6765040) — 1 минуту.

5. Для сохранения микропрепарата рекомендуется заключение в бальзам после обезвоживания в спиртах. Результаты: ядра клеток — сине-фиолетового цвета, цитоплазма, мышечные волокна — различные оттенки розового цвета, муцины — светло-розового, кератогиалины — ярко-розового цвета.

Окрашивание мазков по Граму для выявления бактериальной флоры

1. Фиксация в пламени горелки мазком вниз при круговых движениях — 3 раза. Остудить.

2. Накрыть покровным стеклом с красителем кристаллическим фиолетовым Грама (№ 9990725) — 1 мин.

3. Промыть стекло до чистой промывной воды деионизированной или водопроводной водой.

4. Накрыть покровным стеклом с красителем йодным реагентом по Граму (№ 9990726) — 1 мин.

ПОДРОБНЕЕ:   Если сдать цитологию при месячных

5. Осторожно промыть стекло деионизированной или водопроводной водой. Дать стечь.

6. Промыть стекло с обесцвечивающим раствором (№ 9990727) до потери окрашивания.

7. Осторожно промыть стекло деионизированной или водопроводной водой 5—10 с.

8. Накрыть покровным стеклом с красителем Safranin О (№ 9990728), подкрашивать 1 мин.

9. Осторожно промыть стекло деионизированной или водопроводной водой 5—10 с до чистого цвета воды.

10. Дать раствору стечь и высушить на воздухе. Можно осторожно промокнуть фильтровальной бумагой.

11. Исследовать с иммерсией.

Результаты: бактерии темно-фиолетового цвета — грамположительны. Бактерии грам-отрицательные окрашены в розово-красный цвет. Контролем качества окрашивания мазка является сине-фиолетовый цвет ядер лейкоцитов и эпителиальных клеток.

Молекулярно-биологические методы выявления вируса папилломы человека

Тонкослойные препараты — Cytospins — полученные на основе жидкостной цитологии, позволяют внедрить но вые методы для микроскопической диагностики, в частности, иммуноцитохимические, для выявления микроорганизмов в мазках из шейки матки.

Выявление группы риска при исследовании цервикальных мазков и дальнейший мониторинг позволяют уловить процесс озлокачествления на самых ранних стадиях и получить лучшие результаты лечения, а обнаружение HPV при пограничных и неясных изменениях эпителия шейки матки — выбрать адекватную тактику ведения больных.

Для выявления вируса папилломы человека фирма ЛабМетод предлагает ряд методов.

Метод обеспечивает выявление возбудителя внутри клеток. В основе метода лежит специфическое взаимодействие антигена и антитела. Предлагается широкая панель антител как для скрининга на вирус папилломы человека, так и для типирования вирусов, поскольку для эпителия шейки матки особенно «опасными» являются 16 и 18 типы.

Схема ускоренной окраски гематоксилин-эозином, разработанной в МНИОИ им. П. А. Герцена

1. Мазки погружают в

смесь Никифорова
на 15 минут.

2. Спирт этиловый 70° 2—3 мин,

3. Спирт этиловый 50° 2—3 мин,

4. Вода дистиллированная 1 мин.

5. Краска гематоксилин (по Эрлиху).7-20 мин.
В зависимости от зрелости краски

6. Вода водопроводная 3 мин.

7. 1% раствор соляной кислоты на 70% спирте

~ 1 сек  До побурения препарата

8. Вода водопроводная

Прополоснуть, до посинения препарата

9. Высушить фильтровальной бумагой

10. Спирт этиловый 70° 1 мин.

11. Спирт этиловый 90° 1 мин.

12. Спирт этиловый 96° 1 мин.

13. 0,5—1% спиртовый (96°) раствор эозина  1—2 мин.

14. Спирт этиловый 96° 10—20 сек.

Источник: https://kono-pizza.ru/tsitologiya/metodika-okraski-tsitologii/

Мазок на цитологию (Пап-тест) — что показывает цитограмма?

Окраска цитологических мазков

МАЗОК НА ЦИТОЛОГИЮ — МЕТОД МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ЦЕРВИКАЛЬНОГО ЭПИТЕЛИЯ С ЦЕЛЬЮ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ РАКА ШЕЙКИ МАТКИ.

Мазок на цитологию в первую очередь проводится для обнаружения атипичных клеток, что позволяет на ранних этапах диагностировать дисплазию (CIN, LSIL, HSIL) или рак шейки матки.

Это недорогой и удобный метод для профилактического охвата большого количества женщин.

 Конечно, чувствительность однократного исследования невысокая, однако ежегодный массовый скрининг в развитых странах позволил значительно снизить смертность женщин от рака шейки матки.

В связи с тем, что атипичные клетки могут располагаться на относительно небольшом участке слизистой, очень важно, чтобы материал был получен со всей поверхности шейки матки, особенно из цервикального канала! Для этого созданы специальные щеточки, позволяющие получать материал из недоступных для осмотра областей.

Особое внимание придается зоне трансформации, клетки которой чаще всего подвергаются опухолевому перерождению. Именно в зоне трансформации развивается до 80-90% рака шейки матки, остальные 10-20% приходятся на цервикальный канал.

Когда сдавать мазок на цитологию? Взятие мазка на цитологию следует проводить начиная с 5-го дня менструального цикла и за 5 дней до предполагаемого начала менструаций.

Нельзя проводить анализ в течение двух суток после полового сношения либо введения во влагалище свечей. Несоблюдение этих правил может привести к ошибочной трактовке результатов.

Так же наличие выраженного воспалительного процесса в шейке матки и влагалище серьезно осложняют диагностику.

Следует отметить, что забор материала — это достаточно неприятная процедура. Гинеколог должен соскоблить эпителий с поверхности шейки и зайти в цервикальный канал. Чем больше попадет эпителия из различных зон — тем качественнее диагностика. Иногда после цитологии могут оставаться кровоподтеки, это считается нормальным.

Таким образом, основное значение мазка на цитологию — это определение качественных изменений клеток. Для определения инфекционного агента, вызвавшего воспаление, лучше использовать мазок на флору или бактериологический посев.

Однако при цитологическом исследовании врач может отметить присутствие каких либо микроогранизмов. К нормальной микрофлоре относятся палочки (лактобациллы), единичные кокки, в небольшом количестве может быть условно-патогенная флора.

Наличие специфических инфекционных агентов (трихомонады, амебы, грибы, гонококки, гарднереллы, лептотрикс, хламидии, обилие кокков) считается патологией, которую необходимо лечить.

Обработка мазков. Сроки выполнения цитологии

После забора материала, образец переносится на предметное стекло, фиксируется и окрашивается. При прямом переносе мазка со щеточки возможна частичная потеря материала и деформация клеток, что ведет к снижению чувствительности метода и большому числу ложных результатов. На смену классическому методу пришла жидкостная цитология, что значительно повысило точность и качество исследования.

Жидкостная цитология — это новая технология обработки мазков, которая заключается в помещении проб в контейнер со специальным стабилизирующим раствором. При этом в раствор попадает весь полученный эпителий, который затем центрифугируется и очищается от нежелательных примесей (слизи и др).

На сегодняшний момент жидкостная цитология становится «золотым стандартом» для исследования мазков со слизистой шейки матки. Но и в этом случае чувствительность однократного исследования не превышает 60-70%. В репродуктивном возрасте часты ложноотрицательные результаты, а у женщин в менопаузе — ложноположительные.

Только трехкратное цитологическое исследование позволяет приблизиться к 100%.

Существуют различные методы окраски препаратов: по Papanicolau (Пап-тест), по Романовскому, по Wright-Diemsa, по Граму.

Все методы направлены на окрашивание определенных клеточных структур, что позволяет дифференцировать различные типы эпителия, отличать клетки с ороговением и опухолевой трансформацией.

Тест Папаниколау широко признан и сейчас используется как основной стандартизированный метод.

Сколько времени делается тест? В зависимости от организации процесса результат можно получить в течение 2-3 дней.

Цитограмма без особенностей — что это значит?

Варианты цитологического заключения широко варьируют.

Как вариант нормы, могут употребляться следующие заключения: «цитограмма без особенностей«, «цитограмма в пределах нормы«, «цитограмма без интраэпителиальных поражений«, «цитограмма соответствует возрасту — атрофический тип мазка«, «NILM — Negative for intraepithelial lesion or malignancy«, «пролиферативный тип мазка«. Все это — НОРМА!

Слизистая шейки матки в норме гладкая, блестящая, влажная. Плоский эпителий бледно-розовый, железистый эпителий — ярко красный. Клеточный состав, который можно встретить в нормальной цитологии представлен в таблице.

Цитограмма без особенностей (NILM) у женщин репродуктивного возраста
ЭкзоцервиксХорошо сохранившиеся клетки плоского эпителия, преимущественно поверхностного, промежуточного слоев.
ЭндоцервиксКлетки железистого (цилиндрического) эпителия.
Зона трансформацииКлетки плоского эпителия, единичные клетки или мелкие скопления метаплазированного плоского эпителия, небольшие скопления железистого эпителия.

Атрофический тип мазка — что это значит?

У женщин в переменопаузе и менопаузе за счет снижения общего уровня эстрогенов замедляются многие метаболические процессы, что приводит в результате к атрофии плоского эпителия. Эти изменения можно увидеть в цитограмме.

Атрофический тип мазка относится к варианту нормальной цитограммы. Часто можно встретить в заключении фразу «цитограмма соответствует возрасту» или «возрастные изменения nilm«.

Все это — варианты нормы!

Нужно понимать, что у женщин в менопаузе очень часты ложноположительные результаты цитограммы — тот случай, когда цитологу сложно отличить атрофичный плоский эпителий от дисплазии.

Это нужно понимать, поскольку при последующей биопсии шейки матки патологии обычно не находят.

Кроме того у пожилых женщин может быть склонность к кератинизации эпителия с формированием гиперкератоза (лейкоплакии).

Цитограмма без особенностей (NILM) у женщин в пере- и менопаузе (атрофический тип мазка)
ЭкзоцервиксХорошо сохранившиеся клетки плоского эпителия, преимущественно парабазального и базального слоев. Чаще бывают мазки атрофического типа, но могут быть и пролиферативного или смешанного типов.
ЭндоцервиксОтсутствие клеток цилиндрического (железистого) эпителия не является показателем плохого качества мазка, поскольку в этот период зона трансформации смещается глубоко в канал и для получения железистого эпителия щеточку нужно вводить на глубину более 2-2,5 см.
Зона трансформацииКлетки плоского, метаплазированного эпителия.

Слизистая шейки матки в менопаузе истончена, легко травмируется и подкравливает, что является следствием снижения эстрогенов.

Терминология

Мазок на цитологию- норма

Дискариоз и дискариоциты — аномальные клетки с гиперхромными (плотными и темными) ядрами и нерегулярным ядерным хроматином. За дискариозом последует развитие злокачественного новообразования. Используется как синоним дисплазии, но как более общий термин.

Атипия — любое отличие структуры клетки от нормы. Смысл зачастую зависит от контекста. Но чаще все же используется для описания предопухолевых и опухолевых изменений.

Воспалительная атипия — сочетание дегенеративных, реактивных, пролиферативных изменений клеток при воспалении. Эти изменения могут стать причиной ложно-положительного диагноза дисплазии или рака.

Дисплазия — процесс нарушения созревания плоского эпителия. Является истинным предопухолевым процессом. Имеет 3 степени. К первой обычно относят вирусное поражение, ко второй и третьей — поражение с опухолевым потенциалом.

Дисплазия эпителия тяжелой степени

ASCUS — атипичные клетки, которые трудно дифференцировать с реактивной атипией и собственно предопухолевым процессом. Атипия неясного значения.

Дискератоз — нарушение кератинизации отдельных клеток плоского эпителия. Является признаком ВПЧ.

Паракератоз — нарушение кератинизации эпителиального пласта. Поверхностные клетки плоского эпителия всегда имеют некоторую степень кератинизации — это защитный механизм. Паракератоз может наблюдаться в норме, при раздражении слизистой любой причины, или при ВПЧ-поражении.

Койлоцитоз (койлоцитарная атипия, койлоцит) — специфические изменения ядер, характерные для вируса папилломы человека.

Койлоциты, многоядерная клетка

Гиперкератоз (лейкоплакия) — выраженная кератинизация эпителиального пласта с появлением защитного бесструктурного слоя из кератогиалина. Это нормальный процесс для кожи, но в слизистых оболочках считается патологией. Наблюдается при ВПЧ-инфекции, а также при раздражении слизистой, особенно при опущении органов малого таза, выпадении матки.

Плоскоклеточная метаплазия — защитный механизм, физиологический процесс замещения нежного железистого эпителия более устойчивым плоским эпителием. Метаплазированный эпителий часто становится источником дисплазии и рака, так как легко поражается вирусом папилломы человека.

Железистая гиперплазия — пролиферация, активный рост железистого эпителия. Является реактивным процессом при воспалении, эрозии шейки матки. Часто встречается при использовании гормональных препаратов.

Классификация Bethesda (США) — расшифровка цитограммы

Оценка качества мазка
Материал полноценныйСодержит клетки плоского  и цилиндрического эпителия в достаточном количестве.
Неудовлетворительный для оценки (неинформативный) материалСкудное количество клеток или их отсутствие.
Цитограмма в пределах нормы (NILM)Содержит клетки поверхностного и промежуточного слоев многослойного плоского эпителия, клетки метаплазированного эпителия, лейкоциты, клетки цилиндрического эпителия, клетки эпителия эндометрия.
Метаплазия (норма)Клетки плоского метаплазированного эпителия свидетельствуют о том, что материал забран из зоны трансформации.
Реактивные изменения
Цитограмма воспаленияДегенеративные и реактивные изменения клеток, воспалительная атипия, плоскоклеточная метаплазия, гиперкератоз, паракератоз, койлоцитоз и другие признаки вирусного поражения.
АтрофияКлетки базального и парабазального типов -мелкие клетки с гиперхромным ядром и скудной цитоплазмой. Часто могут ошибочно трактоваться как клетки с атипией, давая ложноположительный результат цитологии.
Патологические изменения эпителия
ASCUS (atypical squmous cells of undetermined significance)Изменения, которые трудно дифференцировать между реактивными изменениями эпителия и дисплазией. При ASCUS определяются клетки, трактовка которых затруднена — клетки с дискариозом, укрупненными и гиперхромными ядрами. Рекомендуется динамическое наблюдение и дообследование, а именно повторное цитологическое исследование через 6 месяцев и ВПЧ-тестирование. В случае подтверждении ASCUS и наличии вируса папилломы человека высокого онкогенного риска — проводится кольпоскопия. Исследования показывают, что 20% женщин с ASC имеют дисплазию после более тщательного обследования.
Предопухолевые изменения
LSIL (CIN I)Слабовыраженное интраэпителиальное поражение, включающее папилломавирусную инфекцию. Рекомендуется наблюдение без активной терапии. У большинства женщин LSIL самостоятельно регрессирует в течение нескольких лет. В эту группу объеденены все изменения с низким злокачественным потенциалом, поскольку цитолог зачастую не может отличить изменения при ВПЧ инфекции и собственно CIN 1.
HSIL (CIN I-II)Умеренно выраженное и тяжелое интраэпителиальное поражение. Рекомендуется удаление всех пораженных тканей методом (конизация) с последующим морфологическим исследованием. В эту группу объеденены все изменения с высоким злокачественным потенциалом.
AGC (atypical glandular cells)Атипические клетки цилиндрического эпителия. Рекомендуется выскабливание цервикального канала для гистологического исследования.
Опухолевые изменения
Плоскоклеточный ракЗлокачественная опухоль из плоского эпителия.
Железистый ракЗлокачественная опухоль из железистого эпителия эндоцервикального типа.
Эндометриальный ракЗлокачественная опухоль, развивающаяся из слизистой оболочки матки и прорастающая в цервикальный канал.

Классификация цитологических изменений по Папаниколау несколько проще, чем Bethesda. Однако, посыл остается тем же. Имеется раздел доброкачественных реактивных изменений, которые не угрожают здоровью, класс предопухолевой патологии и собственно рак шейки матки. Каждый класс выделен на основании прогноза, риска злокачественной трансформации и необходимого медицинского вмешательства.

Классификация цитологических изменений по Папаниколау
I класснорма
II классдоброкачественная атипия (реактивные изменения)
III классдисплазия (предопухолевые изменения)
IV классcancer in situ
V классинвазивный плоскоклеточный рак

Источник: https://gynpath.ru/cytology/

Тест по Папаниколау | Университетская клиника

Окраска цитологических мазков

Тест Папаниколау – это метод исследования биоматериала для выявления атипичных изменений в клетках. Окрашивание по Папаниколау (PAP тест) применяют для оценки состояния клеток женской репродуктивной системы, а именно шейки матки.

Взятие материала на анализ — это безболезненная процедура, которая занимает не более 5 минут. Но своевременная диагностика может спасти жизнь пациентке, поскольку помогает выявить ранние предраковые состояния шейки матки.

Что такое анализ по Папаниколау?

Это исследование считается основой ранней диагностики и профилактики рака шейки матки. Позднее выявление онкологии может привести к опасным последствиям (бесплодие, смерть). Рак практически всегда развивается без выраженных симптомов.

Годами женщина может не подозревать о тяжелой патологии. Первые тревожные признаки часто замечают, когда злокачественная трансформация уже произошла на клеточном уровне.

На этом этапе, как свидетельствует статистика, справляются с болезнью всего 10% пациенток.

Этот тест основан на изучении строения клеток шейки, которые получают при заборе мазка. Мазок на онкоцитологию по Папаниколау женщинам репродуктивного возраста следует сдавать ежегодно.

Жидкостная цитология по Папаниколау – наиболее распространенный и информативный способ диагностики фоновых и предраковых состояний.

Лабораторное исследование клеточного материала выявляет клетки с атипичными ядрами и устанавливает степень созревания цитоплазмы.

Чаще всего PAP тест применяется для диагностики онкологии шейки матки, поэтому методика особенно распространена в гинекологии. Однако иногда окрашивание по Папаниколау проводят для исследования клеток другой природы (например, мазка из прямой кишки).

Кроме онкологии, во время проведения Пап-теста выявляют инфекционные и воспалительные заболевания, а также оценивают состояние микрофлоры влагалища. Поэтому мазок берут из трех областей:

  • влагалищный свод;
  • внешняя часть шейки матки;
  • канал шейки.

По результату анализа материала определяют класс опасности. Тест по Папаниколау может установить пять классов опасности. Каждый из них соответствует определенному этапу развития атипии — дисплазия, фоновое состояние, рак. В норме мазок не содержит аномальных клеток, а первые изменения обычно наблюдают при хроническом воспалении.

Информативность теста – 95%. Это очень высокий показатель по сравнению с другими методиками, которые дают не более 50%. PAP анализ помогает выявить рак еще до появления симптомов. Благодаря применению этого исследования, количество смертей от рака шейки матки удалось снизить в 10 раз.

Особенности подготовки

Чтобы получить достоверный результат анализа, нужно правильно подготовиться к получению биоматериала. Планируйте визит к гинекологу с учетом таких рекомендаций:

  • Забор мазка не проводят во время менструации. Материал берут с 5 по 25 день менструального цикла;
  • За 2-3 суток нужно прекратить спринцевание, поскольку это нарушает естественную микрофлору влагалища;
  • Следует отказаться от лубрикантов, интимных гелей, вагинальных свечей за 3-5 дней до забора мазка, поскольку они могут изменить pH половых путей;
  • За 2-3 суток рекомендуется сохранять половой покой;
  • За 2 дня желательно отказаться от горячей ванны. Лучше проводить интимную гигиену под теплым душем.

Мазок может быть неинформативен, если накануне (1-2 суток) женщина перенесла вагинальное УЗИ или кольпоскопию. Повлиять на результаты исследования может воспалительный процесс или инфекция. Поэтому нужно рассказать врачу о возможных симптомах и подозрениях.

Перед посещением гинеколога нужно опорожнить мочевой пузырь, чтобы избежать дискомфорта Техника проведения процедуры требует надавливания на нижнюю часть живота, что может вызвать подтекание мочи.

Когда проводят тест по Папаниколау?

Забор мазка из шейки матки проводится на приеме гинеколога. В большинстве случаев это профилактическое мероприятие, которое проводят 1 раз в год.

У женщин, входящих в группу риска, онкоцитологию проводят чаще – 2-3 раза в год. В зону повышенного риска попадают пациентки с такими особенностями:

  • отягощенная наследственность (близкие родственницы с онкологией половых органов);
  • ослабленный иммунитет, например, инфицирование ВИЧ;
  • инфицированные вирусом папилломы человека;
  • многократные аборты;
  • хаотичная половая жизнь;
  • игнорирование барьерной контрацепции;
  • злоупотребление алкоголем и табаком;
  • тяжелые осложненные роды в анамнезе.

Как берут мазок?

Взятие мазка по Папаниколау выполняют по следующему алгоритму:

  1. Этап 1. Женщина располагается в гинекологическом кресле. Ноги нужно приподнять и поставить на металлические подставки. Такая поза открывает обзор на половые органы для врача;
  2. Этап 2. Предварительно врач проводит осмотр наружных половых органов. В первую очередь это нужно для обнаружения симптомов ВПЧ. Этот вирус – основная причина развития онкологических заболеваний шейки матки. Доктор обращает внимание на наличие бородавок, кондилом, кровянистых выделений. Если эти признаки обнаружены, дополнительно отбирают для анализа для на ВПЧ. Это специфический анализ, чувствительный в отношении клеток, пораженных ВПЧ. Наружный осмотр также позволяет выявить признаки венерических болезней. Половая инфекция – частая причина выявления аномальных клеток в мазке;
  3. Этап 3. Перед процедурой взятия мазка доктор попросит расслабиться. Спокойное состояние и ровное дыхание способствуют расслаблению мышц влагалища, живота. Врачу будет легче ввести нужные инструменты, а пациентка будет испытывать минимальный дискомфорт;
  4. Этап 4. Для взятия соскоба по Папаниколау доктор вводит медицинский расширитель во влагалище. Расширителем называют медицинский инструмент, который раздвигает вагинальные стенки. Это позволяет врачу тщательно осмотреть шейку матки на предмет разных патологий. Также специалист очищает обнаженную шейку матки от лишней слизи и тканей;
  5. Этап 5. После внутреннего осмотра врач переходит к взятию мазка. Для этого доктор использует цитощеточку. Это медицинский инструмент, по форме напоминающий кисточку от косметической туши. Такая конструкция обеспечивает забор клеток со всех частей шейки матки, что очень важно для качества биоматериала. Процедура длятся 10-20 секунд, и, практически, не доставляет болезненных ощущений;
  6. Этап 6. Со щеточки мазок переносят на медицинское стекло или помещают в специальный раствор (для жидкостной цитологии). Раствор должен быть богат специальными культурами, которые сохраняют состав и свойства клеток. Поэтому материал легко переносит транспортировку и может храниться очень долго. Это позволяет исследовать биоматериал несколько раз для уточнения диагноза. После фиксации биологического материала, его отправляют в лабораторию.

Взятие мазка

Для взятия мазка на онкоцитологию по Папаниколау используют только стерильные, одноразовые инструменты. Длительность процедуры – 5-7 минут. Дискомфорт испытывают женщины с низким болевым порогом.

Кровяные выделения после мазков Папаниколау – естественное явление. Связано это с травмированием слизистых оболочек и тканей шейки матки. Уже через 2-3 дня кровянистые бели проходят без лечения, поскольку микротравмы заживают.

Цитологическое исследование мазков по Папаниколау

В лабораторной практике проводят несколько видов цитологии. Традиционное исследование выполняется с помощью мазков, зафиксированных на предметном стекле.

Биоматериал готовят вручную, что увеличивает риск медицинской ошибки и получения недостоверных результатов. Для жидкостной цитологии мазок помещают в обогащенный полезными бактериями раствор.

После доставки в лабораторию цитобиолог проводит исследование по такому алгоритму:

  • 1 этап – центрифугирование. Специальный аппарат очищает образец от крови и слизи. После очистки в образце остается слой клеток;
  • 2 этап – подготовка к исследованию. Автоматически формируют однослойный образец, в котором все клетки располагаются по порядку. Это позволяет тщательно просматривать структуру клеток;
  • 3 этап – окраска мазка по Папаниколау. Однослойный образец окрашивают с помощью химических реагентов. В зависимости от структуры клеток они окрашиваются по-разному. Например, раковые клетки практически не впитывают вещества, поэтому не меняют цвет. Также специальный раствор проявляет клеточное строение для оценки под микроскопом;
  • 4 этап – исследование под микроскопом. Врач-цитолог анализирует строение клеток методом микроскопии. Полученные результаты специалист отражает в протоколе исследования.

Главное преимущество жидкостной цитологии – длительное хранение образца. При необходимости повторного исследования пациентке не нужно сдавать новый биоматериал. В ряде случаев повторная диагностика очень важна для своевременной постановки диагноза. А очередное взятие мазка по Папаниколау можно проводить только через 3 месяца.

Метод Папаниколау: расшифровка

Цитология шейки матки по Папаниколау интерпретируется только лечащим врачом. В протоколе исследования пациентка может увидеть разные варианты заключения цитобиолога.

Начинают исследование с оценки качественного состава мазка. В мазке должны быть клетки со всей поверхности шейки матки в достаточном количестве.

Только такой образец считается качественным и может дать достоверные результаты.

Тест Папаниколау на рак шейки матки может дать такие результаты:

  1. 1 класс – наблюдают клетки стандартной формы и размера. Изменений в биоматериале не обнаружено, что соответствует нормальной цитологической картине;
  2. 2 класс – морфологические отклонения в клеточном строении. Часто их провоцирует хроническое воспаление или инфекция в половых путях. При таком результате гинеколог назначает противовоспалительные препараты или антибиотики;
  3. 3 класс – в клетках обнаруживают выраженные признаки дисплазии. Единичные клетки с аномальным ядром могут указывать на развитие злокачественного образования. В такой ситуации понадобится дополнительное обследование с кольпоскопией, биопсией, гистологией;
  4. 4 класс – фоновое предраковое состояние. В образце найдено большое количество измененных клеток, что позволяет заподозрить онкологию. Гинеколог направляет пациентку на консультацию к онкологу;
  5. 5 класс – онкология шейки матки. В образце обнаружено большое количество клеток с выраженными признаками озлокачествления. Женщину направляют на лечение в онкологическое отделение.

Интерпретация результатов позволяет сделать вывод о степени чистоты половых путей. У здоровой женщины выявляют первую или вторую степень чистоты. В первом случае обнаруживают только лактобактерии, которые защищают половые пути от инфекции. Во втором случае в мазке присутствуют единичные клетки патогенной флоры (грибок, кишечная палочка, стафилококк, др.).

Мазок по методу Папаниколау позволяет диагностировать такие половые инфекции:

  • Вирус папилломы человека (ВПЧ) – гинекологи называют главной причиной развития рака шейки;
  • Хламидиоз – трудно диагностируемое заболевание. Это замедляет лечение и приводит к серьезным осложнениям (абсцесс, проблемы с зачатием);
  • Гонорея – часто становится причиной бесплодия;
  • Генитальный герпес – вылечить эту патологию полностью невозможно. Признаки болезни проявляются при снижении защитных сил организма. Без адекватной медицинской поддержки болезнь доставляет массу неприятностей. Открытые ранки, из которых выделяется жидкость, постоянно болят и зудят;
  • Кандидоз – это грибковая инфекция, снижающая качество жизни. Женщина страдает от зуда и постоянного жжения во влагалище;
  • Трихомониаз – это венерическая болезнь, которая сопровождается зелеными выделениями из влагалища. Болезнь опасна хроническим воспалением, поражением придатков, проблемами с вынашиванием ребенка.

Если в первичном образце обнаружена инфекция, выявить раковые клетки достаточно сложно. Поэтому после полного выздоровления пациентке назначают повторную онкоцитологию. Сдать мазок на PAP-исследование безопасно и безболезненно можно в любом филиале Университетской клинике. 

ссылкой:

Источник: https://unclinic.ru/test-po-papanikolau/

О вашем здоровье
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: